磷酸化氨基酸的連接一般采用HBTU/HOBt/DIEA方法，但是目前采用該方法合成磷酸化也有缺點，特別是在合成多磷酸化多肽或(huo)長肽的(de)(de)時(shi)候，連(lian)接效率低，zui后產品純度(du)很低，對于(yu)這種磷(lin)酸化(hua)多肽，我們考慮采(cai)用后磷(lin)酸化(hua)方法(fa)，其合(he)成(cheng)(cheng)過(guo)(guo)程(cheng)就是在(zai)多肽合(he)成(cheng)(cheng)結束后，選擇性(xing)脫去要標記的(de)(de)氨基(ji)(ji)酸的(de)(de)側鏈保護(hu)基(ji)(ji)，對于(yu)Tyr，Thr可(ke)以(yi)直接使用側鏈不(bu)保護(hu)的(de)(de)氨基(ji)(ji)酸進行反應，而Ser可(ke)以(yi)采(cai)用Fmoc-Ser(trt)，在(zai)1% TFA/DCM條件下可(ke)以(yi)定量的(de)(de)脫除。后磷(lin)酸化(hua)，采(cai)用雙(shuang)芐基(ji)(ji)亞(ya)磷(lin)酰胺，四氮唑(zuo)生成(cheng)(cheng)亞(ya)磷(lin)酰胺四唑(zuo)活(huo)性(xing)中間(jian)體，連(lian)接到羥基(ji)(ji)上，隨(sui)后在(zai)過(guo)(guo)氧酸下氧化(hua)生成(cheng)(cheng)磷(lin)酰基(ji)(ji)，完(wan)成(cheng)(cheng)反應。