多肽抗原南京肽業

多肽抗原方案設計(ji)

難于(yu)獲得困難、分(fen)子量小、同源(yuan)性較高不易與(yu)(yu)其他區分(fen)的抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)，我們可以考慮采用多肽(tai)(tai)合成方法制備(bei)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)；多肽(tai)(tai)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)為(wei)半抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)，必(bi)須與(yu)(yu)載體偶(ou)聯形成*抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)才(cai)可以免疫動(dong)物。多肽(tai)(tai)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)方案制備(bei)抗(kang)(kang)體核(he)心是多肽(tai)(tai)選(xuan)取與(yu)(yu)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)表位(wei)的設計。多肽(tai)(tai)設計前首先對抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)蛋白進(jin)行(xing)系(xi)統分(fen)析(xi)，分(fen)析(xi)方法與(yu)(yu)原(yuan)(yuan)核(he)重組表達蛋白相同，在此不做贅述。

1．多肽設計通用原則(ze)

u  外(wai)源性(xing)原則(ze)：

設計多(duo)肽序列與被免疫宿主蛋白序列不同源(yuan)（Blast檢索）。

u  特異性(xing)原則：

設(she)計(ji)多(duo)肽序列與自身物種(zhong)其他蛋白序列不同源（Blast檢(jian)索）。

u  親水(shui)性原則：

蛋白質都是將親(qin)水部分暴露在外，只有抗原更好(hao)的(de)溶于水相(xiang)才能更好(hao)地激發免疫反應，因此設(she)計(ji)的(de)多肽一定要親(qin)水性好(hao)（通過DNassist，GCG，ProtScale等軟件預測親(qin)水性）。

u  C末端性原則

末端肽(tai)(tai)(tai)段比(bi)內部肽(tai)(tai)(tai)段暴(bao)露性(xing)更(geng)(geng)好(hao)，更(geng)(geng)容易制(zhi)備抗體，但膜蛋白(bai)C端疏(shu)水性(xing)比(bi)較強(qiang)，一般選擇N端多肽(tai)(tai)(tai)。

u  結構原(yuan)則

序列不形成(cheng)α-helix、內部重(zhong)復或接(jie)近重(zhong)復段的序列。

u  氨基酸原則

 序列內Pro(脯氨(an)(an)酸(suan)(suan))一(yi)般不超(chao)過2個；同時盡量包括(kuo)MHC類分子偏好(hao)的Asp，Tyr，Phe等氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)，避免容易(yi)發生(sheng)糖(tang)基(ji)(ji)化(hua)的氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)（如Asn、 Ser 、Thr和(he)Hyp）和(he)磷酸(suan)(suan)化(hua)的氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)（Ser、Thr和(he)Tyr）。

u  連接臂原則

一(yi)(yi)般在(zai)肽(tai)鏈上(shang)加(jia)(jia)一(yi)(yi)個聯接(jie)臂便于(yu)多(duo)肽(tai)與載體(ti)偶聯，常用的(de)是加(jia)(jia)Cys的(de)-SH，加(jia)(jia)在(zai)對抗體(ti)產生影(ying)響小的(de)那(nei)一(yi)(yi)端(duan)：選擇N末端(duan)多(duo)肽(tai)序列(lie)的(de)加(jia)(jia)在(zai)多(duo)肽(tai)C端(duan)；選擇C末端(duan)序列(lie)則-SH加(jia)(jia)在(zai)N端(duan)，選擇中間肽(tai)段加(jia)(jia)在(zai)對抗體(ti)制備影(ying)響比較小的(de)那(nei)一(yi)(yi)端(duan)。

u  長度(du)原則

抗原表位(wei)一(yi)般(ban)是6～8個氨(an)(an)基(ji)酸(suan)組成(cheng)，多肽做抗原的時候一(yi)般(ban)設計15～20個氨(an)(an)基(ji)酸(suan)，一(yi)方面為防止(zhi)蛋(dan)白質水(shui)解，另一(yi)方面為了保證表位(wei)覆蓋(gai)率(lv)。鏈(lian)太長則易造成(cheng)鏈(lian)內(nei)二級結構(gou)，同時增加合成(cheng)的成(cheng)本。

u  純度原則

用于制備抗體的多肽，85%以上的純度就足夠(gou)了(le)，純度越高合成的成本越高。

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