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了解一下多肽修飾的方法有哪些吧

更新時間:2020-04-17      點擊次數:1184
  化學法是目前多肽修飾中研究成熟、應用廣泛的修飾方法,它主要包括液相法和固相法。
 
  1)液相法
 
  液相法是一種經典的方法,在純度監測和規模化生產等方面具有*優勢。在肽的環化修飾中,為避免發生分子間反應生成線性或環狀的二聚體和多聚體,反應需要在高度稀釋的溶液中進行(10-3 ~10-4 mol/ L)。但在此高度稀釋的條件下,常存在反應時間延長、副反應較多等局限性,給后處理增加不便。針對這種情況,使用一種空間位阻大的樹突狀硅烷取代碳二亞胺作為縮合劑,代替常
 
  規試劑二環己基碳二亞胺(DCC)進行溶液方式的內酰胺環肽合成,得到純度很高的目標化合物。
 
  2)固相法
 
  固相法因為易于分離純化而廣泛應用在肽修飾中,采用此法合成的肽修飾物其產率和分離純度也明顯高于采用液相法。在固相肽合成中,C 末端氨基酸殘基與載體相連后再組裝剩余氨基酸,對合成C 末端修飾肽存在著先天障礙。選用相對普通的2-氯三苯甲基氯樹脂為載體,固相合成全保護肽亮丙瑞林(Py r-Hi s-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-eu-A rg-Pro-NHEt),25 ℃下乙胺化反應5 min 后直接切割側鏈,實現了肽片段乙胺化和側鏈切割步驟的連續耦合進行,避免了中間產物的分離純化,成功為其他C-末端多肽修飾提供借鑒。
 
  3)酶法
 
  酶在修飾位點的立體選擇性和溫和快速高效的合成反應條件等方面具有極大的優勢。在糖肽合成中,糖基氨基酸經酶促縮合反應接入寡肽,然后用糖基轉移酶完成進一步的寡糖修飾,這種酶促反應可以在水溶液中進行,并且只需要小限度的保護。但是酶存在著來源單一,不易獲取等局限性。此外底物中肽鏈氨基酸順序有可能會影響其修飾效率,以酶法將半乳糖胺連接到肽段上合成糖肽時,發現反應的產率取決于底物的結構和糖基化兩個因素,普遍較低。隨著DNA 技術的發展和研究的不斷深入,酶將在肽修飾中發揮越來越重要的作用。
 
  4)化學酶法耦合
 
  采用化學和酶法相結合的化學酶法來進行肽修飾研究,可減少化學試劑的過量使用帶來的污染,同時也保證了溫和條件下酶催化的產率。固相合成N 端共軛糖基內嗎啡肽-1 衍生物,再在糖基轉移酶的催化下將N-乙酰基胺基葡糖化合物連接到化學法合成的糖肽上,形成目標產物N端三糖肽內嗎啡肽-1 類似物,此合成過程只需小限度的保護。以修飾的硅膠為固相載體,此載體上用化學法快速合成肽鍵并酶法合成糖苷鍵,成功合成Sialyl lew is x 抗原。

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